蛋白質免疫測定：認識多克隆抗體和單克隆抗體

  為您的蛋白質免疫測定找到合適的抗體可能具有挑戰(zhàn)性。一種抗體在某項測定中效果良好，但在另一種測定中可能無法發(fā)揮作用。因此，本文將為您提供有關兩種廣泛使用的抗體（單克隆抗體和多克隆抗體）之間差異的有用信息。此外，在您選擇抗體之前，我們還提供了一些注意事項。

  在本文中中你將了解到：

1.   什么是抗體？

2.   什么是單克隆抗體和多克隆抗體？

3.   單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別？

4.   單克隆抗體和多克隆抗體是如何產(chǎn)生的？

5.   單克隆抗體和多克隆抗體的用途是什么？

6.   如何選擇抗體

  什么是抗體？

  抗體是血液中免疫系統(tǒng)的蛋白質成分，可識別細菌和病毒等入侵者?？乖钦T導免疫反應激活（包括抗體產(chǎn)生）的外來物質。而表位是抗體結合的抗原的一部分。

  

  在蛋白質研究中，有兩種流行的抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體。

  什么是單克隆抗體和多克隆抗體？

  單克隆抗體是 針對抗原的單一表位的相同抗體群。

  

  多克隆抗體是 針對同一抗原內許多表位的異質抗體 群體。

  

  單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別？

  這兩類抗體的主要區(qū)別：

•   單克隆抗體

  單克隆抗體中的抗體群體是同質的。

  它們識別抗原的單個表位。

  單克隆抗體的生產(chǎn)涉及動物和雜交瘤細胞（源自脾細胞和骨髓瘤細胞融合的細胞）。

•   多克隆抗體

  多克隆抗體群體是異質的。

  它們識別抗原中的多個表位。

  多克隆抗體的生產(chǎn)只需要動物。

  單克隆抗體和多克隆抗體是如何產(chǎn)生的？

  單克隆抗體的生產(chǎn)首先向動物注射抗原。幾周后，收集脾細胞并與骨髓瘤細胞融合。脾細胞產(chǎn)生抗體，但它們無法在培養(yǎng)物中生長。相反，在培養(yǎng)物中生長的骨髓瘤細胞無法產(chǎn)生抗體。兩種細胞融合后，選擇并培養(yǎng)雜交細胞，也稱為雜交瘤細胞，以產(chǎn)生相同的單克隆抗體。

  多克隆抗體是通過將特定抗原注射到動物體內來產(chǎn)生的。幾天后，動物接受加強注射抗原，以產(chǎn)生大量針對該抗原的抗體。然后，收集或純化含有多克隆抗體的血清。

  

  單克隆抗體和多克隆抗體各有哪些優(yōu)缺點？

•   單克隆抗體

  優(yōu)點：

  對單一表位具有高特異性

  交叉反應風險低

  批次間差異較小

  缺點

  抗原容易發(fā)生輕微變化

  昂貴的

  更多的時間來生產(chǎn)

•   多克隆抗體

  優(yōu)點：

  抗原不易發(fā)生輕微變化

  對目標抗原具有高靈敏度和親和力

  更便宜

  快速生產(chǎn)

  缺點：

  交叉反應風險高

  容易出現(xiàn)批次差異

  單克隆抗體和多克隆抗體的用途是什么？

  單克隆抗體

  單克隆抗體具有高特異性，因此它們可用于一些需要對單個表位具有特異性的抗體的研究應用。因此，生產(chǎn)治療性抗體是藥物開發(fā)的一種有吸引力的方法。

  單克隆抗體還可用于定量特定靶蛋白的水平；例如，在 ELISA 或放射免疫測定中。

  RELA單克隆抗體

  它們還可用于蛋白質印跡 (WB)、免疫組織化學 (IHC) 和免疫熒光測定 (IF)。然而，根據(jù)表位的不同，單克隆抗體也可能對這些方法無效。由化學物質、pH 值或溫度引起的蛋白質結構的變化會影響單克隆抗體的效率。

  針對天然蛋白質產(chǎn)生的單克隆抗體可以識別構象表位或含有不連續(xù)氨基酸殘基的表位。因此，這些單克隆抗體可能無法識別靶蛋白變性狀態(tài)上的表位。

  

  不連續(xù)殘基是一級序列中相距較遠，但折疊結構中彼此接近的氨基酸。在這種情況下，選擇可以識別連續(xù)殘基或線性表位的單克隆抗體。否則，請考慮使用多克隆抗體。

  多克隆抗體

  多克隆抗體可用于許多一般研究應用和診斷測定，因為它們對目標抗原具有高親和力并且對目標蛋白的微小變化具有耐受性，

  細胞色素c多克隆抗體

  多克隆抗體的應用包括以下方法中的一種或多種：蛋白質印跡、ELISA、免疫組織化學、免疫熒光測定和免疫沉淀 (IP)。

  如果針對變性抗原產(chǎn)生多克隆抗體，則多克隆抗體可識別變性狀態(tài)下靶蛋白的表位。測定過程中的處理，例如免疫組織化學過程中的福爾馬林固定，可以改變組織分子以形成交聯(lián)并掩蓋表位。因此，在蛋白質印跡中表現(xiàn)良好的多克隆抗體可能無法在免疫組織化學中識別靶蛋白。

  多克隆抗體可能會導致交叉反應和高背景噪音。因此，在進行檢測時，必須包含良好的對照，例如蛋白質印跡中的純化重組蛋白作為參考。

  在選擇之前，將抗體與檢測方法相匹配并研究其詳細信息，包括抗體的特異性。

  驗證抗體特異性的一種方法是使用基因敲除 (KO) 驗證。使用此方法驗證的特定抗體通常不會在敲除細胞系的蛋白質印跡上產(chǎn)生信號，但會在野生型細胞系的預期大小上產(chǎn)生良好的信號。

  如何選擇抗體

  檢查有關抗體類型和驗證的信息。

  根據(jù)有關應用的信息將抗體與您的蛋白質檢測相匹配。

  當檢測需要高特異性時，選擇單克隆抗體。

  選擇多克隆抗體進行需要高靈敏度和親和力的檢測。

  考慮抗體的成本以及您的檢測所需的數(shù)量。例如，使用昂貴的抗體并運行特定的測定（例如 ELISA）可能會變得過于昂貴。

  通過查找有關檢測中需要多少稀釋度的信息來檢查抗體的靈敏度。

  確保疊氮化鈉或 BSA 等添加劑與您在測定中使用的試劑兼容。

  在將抗體用于重要樣品之前，先用重組靶蛋白測試抗體。

  在蛋白質檢測中包括陽性和陰性對照。