【通蔚生物】: 石蠟切片免疫組化原理

石蠟切片免疫組化原理將樣本固定后包埋到石蠟內(nèi)，將包埋后的組織切片經(jīng)脫蠟處理并微波修復(fù)抗原，加3%過氧化氫阻斷組織內(nèi)源性過氧化物酶，一抗特異性結(jié)合目的蛋白，4 ℃孵育過夜后，37 ℃復(fù)溫30 min，PBS洗滌干凈后加入二抗孵育35 min（二抗結(jié)合特異一抗），洗凈后加顯色劑，二抗的標(biāo)記與顯色劑反應(yīng)顯色。顯色完成后加蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，1%的鹽酸酒精分化后，水洗返藍(lán)再脫水封片，晾干后即可在鏡下觀察組織陽性表達(dá)分布。

1．石蠟切片脫蠟至水：（石蠟切片染色前應(yīng)置 60℃ 1 小時(shí)） 。
2．過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2 O2 ，室溫 10 分鐘（避光）
3．蒸餾水洗：5 分鐘，2 次（置于搖床） 。
4．抗原修復(fù)：根據(jù)待檢測的抗原，選擇適當(dāng)?shù)姆椒ā?/span>
5．PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床） 。
6．正常血清封閉：從染片缸中取出切片，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分 （保持組織呈濕潤狀態(tài),）滴加正常山羊或兔血清 （與第二抗 體 同源動(dòng)物血清）處理，37℃，15 分鐘。
7．蘇木素復(fù)染，室溫，30 秒，自來水沖洗。
8．梯度酒精脫水：80%，2 分鐘 95%，2 分鐘 100%，2 次，5 分鐘。
9．二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分鐘
10．封片：加拿大樹膠（或中性樹膠）封片