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    品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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    產(chǎn)品中心

    最新產(chǎn)品

    • 甲型流感病毒乙型流感病毒新型冠狀病毒三重探針法qRT-PCR試劑盒

      規(guī)格:
      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目錄號 : TW-E10715
      • 應用 : 僅限于科研使用
      • 貨期 : 1年
      • 規(guī)格 :50T
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    • 相關產(chǎn)品

    產(chǎn)品及特點

    呼吸道感染常見的病原體主要包括病毒、支原體、細菌三大類,其中由病毒感染引發(fā)的呼吸道感染疾病占總數(shù)的85%以上。流行性較強的流感病毒包括甲型流感病毒和乙型流感病毒,這兩種病毒的臨床癥狀與新冠病毒感染的臨床癥狀相似增加了防控壓力。甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的流行給人類健康造成不良影響,因此快速檢測和區(qū)分甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒具有重要的意義本產(chǎn)品就是以探針法qRT-PCR技術為基礎開發(fā)的同時檢測甲流、乙流及新冠的檢測試劑盒,它具有下列特點:

    1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
    2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,分析靈敏性高,可以達到100拷貝/反應。
    3. 提供陽性對照,便于排除假陰性結果。
    4. 特異性高,引物和探針分別根據(jù)甲流病毒RNA、乙流病毒RNA及新冠病毒RNA高度保守區(qū)設計,不會跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應。
    5. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為4個數(shù)量級。
    6. 甲流病毒、乙流病毒及新冠病毒的三個基因分別用FAM、ROX和HEX標記的三個探針檢測。
    7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法RT-PCR反應。
    8. 本產(chǎn)品只能用于科研。

    規(guī)格及成分

    成分

    規(guī)格

    包裝

    探針法qRT-PCR緩沖液

    500μL

    0.5mL藍蓋管

    探針法qRT-PCR酶混合液v2

    100μL

    0.5mL紅蓋管

    熒光PCR專用模板稀釋液

    1mL

    1.5mL綠蓋管

    甲流、乙流及新冠病毒三重RT-PCR引物-探針干粉

    50次

    0.5mL棕色管

    甲型流感病毒陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

    50μL

    0.5mL棕色管

    乙型流感病毒陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

    50μL

    0.5mL棕色管

    新型冠狀病毒陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

    50μL

    0.5mL黃蓋管

    使用手冊

    1份

    1份

    本產(chǎn)品采用孔盒包裝

    意:在使用前需要短暫離心引物-探針干粉管,然后在離心管中加入220uL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存


    使用方法

    稀釋甲型流感病毒標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
    由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
    1. 標記6個離心管,分別為A6,A5,A4,A3,A2,A1。
    2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
    3. 在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
    4. 換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
    5. 換槍頭,在4號管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
    6. 重復上面的操作得到A1-A6共六個稀釋度標準曲線陽性樣品。放冰上待用。

    稀釋乙型流感病毒檢測標準曲線樣品
    7. 如果有N個樣品,設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10 μL上步所得第4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
    稀釋新型冠狀病毒檢測標準曲線樣品
    8. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容,也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
    樣品RNA的制備
    9. 如果有N個樣品,設置N+2個提取,多出的一個是新型冠狀病毒的PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂米詡涞?、確定是陽性的樣本作為樣品制備陽性對照,可以用自備的、確定是陰性的樣本作為樣品制備陰性對照,可以用水替代。

    數(shù)據(jù)處理
    1. 如果所有標曲擴增或制備陽性對照結果為陰性,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數(shù)據(jù),需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結果為陽性,說明環(huán)境污染,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數(shù)據(jù),需要跟廠家聯(lián)系,購買新的引物和探針。
    2. 如果陰性對照和陽性對照正常,則實驗有效,可以進入后續(xù)分析。
    3. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,分別以甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的陽性對照(FAM通道、HEX通道和ROX通道)Ct值為縱軸,繪制標準曲線,陽性對照的標準曲線為斜線,r2必須大于0.95。再以待測樣品的Ct值從陽性對照的標準曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
    4. 對定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照FAM通道、HEX通道和ROX通道的Ct必須大于或等于40。甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒陽性對照FAM通道、ROX通道和HEX通道的熒光信號必須有對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于或等于35。對待測樣品,如果其FAM通道的ct值大于或等于40則為甲型流感病毒陰性,如果小于或等于35則為甲型流感病毒陽性。如果其ROX通道的ct值大于或等于40則為乙型流感病毒陰性,如果小于或等于35則為乙型流感病毒陽性。如果其HEX通道的ct值大于或等于40則為新型冠狀病毒陰性,如果小于或等于35則為新型冠狀病毒陽性。

    自備試劑
    樣品RNA
    運輸及保存
    低溫運輸,-20℃保存,有效期2年
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