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隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒
產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：
產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：
本產(chǎn)品對Feinberg和Vogelstein經(jīng)典方法進行了改良，它具有下列特點：
1. 提供的標記反應液整合了除酶和模板外的所有成分，簡化了反應加樣步驟，提高了標記反應的可重復性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標記DNA探針不會被酶降解，探針產(chǎn)量更高。
3. 快速，1小時即可完成標記反應。
4. 所需模版DNA量少，模板可以是線狀或環(huán)狀的、也可以是單鏈或雙鏈的，但長度必須在100 bp以上。
5. 得到的探針長度一般在200-400 nt之間（如果模板長度在1kb以上），可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
6. 本產(chǎn)品足夠5次DNA探針地高辛標記實驗。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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5×隨機引物地高辛標記反應液 |
20uL |
0.5mL綠蓋管 |
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隨機引物(6堿基，無修飾)干粉 |
5次 |
0.5mL本色管 |
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Klenow exo-聚合酶，5U/uL |
5uL |
0.5mL紅蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品使用五孔盒包裝 |
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使用方法
1. 首次使用本產(chǎn)品時，需要在隨機引物干粉管子中加入25uL超純水，渦旋震蕩30秒，短暫離心10秒。得隨機引物溶液，放冰上待用。
1. 首次使用本產(chǎn)品時，需要在隨機引物干粉管子中加入25uL超純水，渦旋震蕩30秒，短暫離心10秒。得隨機引物溶液，放冰上待用。
2. 在一干凈的塑料離心管中加入下列成分：
注 意：模板DNA并非越多越好，因為模板DNA沒有標記，新合成的DNA才帶有標記，因此模板DNA越多，在雜交反應時這些沒有標記的DNA對標記DNA的競爭性抑制就越強，降低雜交信號強度。
3. PCR儀上100℃加熱10分鐘使模板DNA徹底變性。
4. 立即放冰上待用。不能緩慢降溫，否則變性的模板DNA單鏈又會雜交形成雙鏈。
5. 離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
6. 加入1 uL Klenow exo DNA聚合酶，輕柔吹打混勻。此時反應總體積為20uL。
7. 37℃保溫1-20小時。標記效率跟模板DNA和保溫時間相關，模板越多，新合成探針多，但新合成探針/模板比例低，雜交信號低。模板越少，新合成探針少，但探針/模板比例高，雜交信號高。但探針少到一定程度，也不會有雜交反應發(fā)生。因此用戶需要探針合成量和雜交信號強弱在這兩者之間進行折衷選擇。
8. 反應結束后加熱100℃ 5分鐘使DNA聚合酶變性，同時使DNA探針變性成單鏈。變性后的標記反應液可以放-20℃長期保存，也可以直接將變性后的探針加入到雜交反應液中進行雜交。如果電泳檢測，標記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài)。
注 意：本方法標記核苷酸摻入率極高，因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化，不要用酚抽提法純化非同位素標記的DNA探針，因為這些標記分子（如生物素或地高辛等）疏水性強，能使標記的DNA進入疏水的有機相而丟失。只能選擇乙醇直接沉淀或Sephadex G50過柱回收（需另購柱式探針純化試劑盒）。
自備試劑
模板DNA
模板DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
