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禽白血病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus，ALV）屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科禽C 型反錄病毒群的一種RNA病毒，能夠引起禽白血?。ˋvian Leukosis）。禽白血病是多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，這些疾病主要是淋巴白血病，其次是成紅細(xì)胞白血病等?；茧u不但產(chǎn)生淋巴樣腫瘤，其產(chǎn)蛋量還將下降。由于該病以垂直傳播為主，故難以控制。它還使患雞抵抗力下降后，容易感染多種其它疾病，給雞群的飼養(yǎng)管理帶來極大困難，所以禽白血病一直被認(rèn)為是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的重要的禽病之一。禽白血病病毒還常常污染禽用疫苗、犬用疫苗，甚至人用疫苗，給生物制品工業(yè)、醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究方面也造成巨大危害。因此快速診斷禽白血病病病毒具有重要的意義。本產(chǎn)品以探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測禽白血病病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus，ALV）屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科禽C 型反錄病毒群的一種RNA病毒，能夠引起禽白血?。ˋvian Leukosis）。禽白血病是多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，這些疾病主要是淋巴白血病，其次是成紅細(xì)胞白血病等?；茧u不但產(chǎn)生淋巴樣腫瘤，其產(chǎn)蛋量還將下降。由于該病以垂直傳播為主，故難以控制。它還使患雞抵抗力下降后，容易感染多種其它疾病，給雞群的飼養(yǎng)管理帶來極大困難，所以禽白血病一直被認(rèn)為是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的重要的禽病之一。禽白血病病毒還常常污染禽用疫苗、犬用疫苗，甚至人用疫苗，給生物制品工業(yè)、醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究方面也造成巨大危害。因此快速診斷禽白血病病病毒具有重要的意義。本產(chǎn)品以探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測禽白血病病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/μL。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)禽白血病病毒RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法qRT-PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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探針法RT-PCR緩沖液 |
0.5mL |
0.5mL藍(lán)蓋管 |
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探針法RT-PCR酶混合液v2 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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熒光PCR模板專用稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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禽白血病病毒qRT-PCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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禽白血病病毒qRT-PCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165μL的超純水充分混勻后得到引物-探針混合液再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號(hào)管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是樣品制備PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是樣品制備NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為樣品制備PC。另外用水作為樣品制備NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
設(shè)置qRT-PCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），5個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對照（用試劑盒提供的陽性對照的10000倍稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴(kuò)增陽性對照或制備陽性對照結(jié)果為陰性，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴(kuò)增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴(kuò)增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于35。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于35，否則實(shí)驗(yàn)無效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于35，則為陰性。如果Ct小于35則為陽性。
自備試劑
樣品RNA，超純水
樣品RNA，超純水
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
