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測(cè)定意義
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的 關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑 應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理
S-BXL分解4-MUF-β-D-木糖苷生成熒光物質(zhì)，通過測(cè)定熒光值升高速率來計(jì)算S-BXL活性。
自備用品
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、黑色96孔板和蒸餾水。
測(cè)定步驟
1、熒光酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，設(shè)置激發(fā)光波長(zhǎng) 355 nm，測(cè)定波長(zhǎng) 450nm。
2、加樣表
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
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試劑名稱 |
測(cè)定管 |
空白管 |
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震蕩條件下取勻待測(cè)液（μL） |
200 |
- |
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蒸餾水（μL） |
- |
200 |
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試劑二（μL） |
200 |
200 |
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混勻， 30℃避光振蕩反應(yīng)3h后， 3000g 4℃離心3min，取上清液200μL于黑色96孔板中，檢測(cè)熒光值，激發(fā)波長(zhǎng)355nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm。熒光值分別為A測(cè)定A空白，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A空白管。 |
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預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
