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致瀉性大腸桿菌探針法雙管五重分型qPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
致瀉性大腸桿菌(Diarrheagenic Escherichia coli，DEC，致瀉性大腸埃希氏菌)是引起引起腸道內(nèi)急性腹瀉的大腸桿菌統(tǒng)稱。我國發(fā)生的食物中毒事件中，細(xì)菌性食物中毒的人數(shù)，占總中毒人數(shù)的42.8％，致瀉性大腸桿菌根據(jù)其毒力因子、致病機(jī)理和流行病學(xué)特征可分為5類，分別是腸道聚集性大腸桿菌(Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC)、腸道致病性大腸桿菌(Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC)、腸道侵襲性大腸桿菌(Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(Shigatoxin-producing Escherichia coli，STEC)或稱為腸道出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。感染致瀉性大腸桿菌型別不同，臨床癥狀也有一定的差異，給針對性治療帶來困擾。因此快速檢測和對致瀉性大腸桿菌進(jìn)行分型具有重要意義。本產(chǎn)品就是為滿足此需求的探針法PCR試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
致瀉性大腸桿菌(Diarrheagenic Escherichia coli，DEC，致瀉性大腸埃希氏菌)是引起引起腸道內(nèi)急性腹瀉的大腸桿菌統(tǒng)稱。我國發(fā)生的食物中毒事件中，細(xì)菌性食物中毒的人數(shù)，占總中毒人數(shù)的42.8％，致瀉性大腸桿菌根據(jù)其毒力因子、致病機(jī)理和流行病學(xué)特征可分為5類，分別是腸道聚集性大腸桿菌(Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC)、腸道致病性大腸桿菌(Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC)、腸道侵襲性大腸桿菌(Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(Shigatoxin-producing Escherichia coli，STEC)或稱為腸道出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。感染致瀉性大腸桿菌型別不同，臨床癥狀也有一定的差異，給針對性治療帶來困擾。因此快速檢測和對致瀉性大腸桿菌進(jìn)行分型具有重要意義。本產(chǎn)品就是為滿足此需求的探針法PCR試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)致瀉性大腸桿菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 可以用于分型，兩管式擴(kuò)增，一次能區(qū)分5種致瀉性大腸桿菌。
6. 用于定量檢測和分型，不建議用于定量。分型后可以再另購定量試劑盒。
7. 本產(chǎn)品足夠100次20μL體系的兩管式5重探針法qPCR反應(yīng)，足夠檢測50個(gè)樣本（算上對照，每個(gè)樣本測兩次）。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
樣品管 |
PCR |
1-5 PCR 陽性對照管 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
各10μL |
10μL |
10μL |
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三重致瀉性大腸桿菌探針法qPCR引物-探針混合液（EAEC、EPEC、EIEC） |
各3μL |
3μL |
3μL |
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N+2個(gè)待測DNA樣本 |
各7μL |
不加 |
不加 |
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自備超純水 |
不加 |
7μL |
不加 |
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大腸桿菌探針法qPCR陽性對照(1×10E4拷貝/μL)（從提供的5種中任選1-5種） |
不加 |
不加 |
各7μL |
使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL試劑盒提供的陽性對照再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為樣本制備的PC。另外用水作為樣本制備的NC。
2. 用自選方法純化樣品的DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的核酸純化試劑盒。
設(shè)置三重Probe qPCR反應(yīng)20μL體系
3. 首次使用本產(chǎn)品時(shí)，需要在本試劑盒提供的兩管引物探針干粉管中，各加入165 μL自備的超純水，渦旋震蕩30秒混勻后放冰上待用。沒有用完的部分需要放-20℃。
4. 如果每個(gè)樣本只做1次重復(fù)，則需要N+2個(gè)管用于N+2個(gè)樣本，另外1個(gè)管用于PCR陰性對照（用水做模板），1-5個(gè)管用于PCR陽性對照（試劑盒提供5種DEC的陽性對照，用戶可以任意選擇1-5種）。
設(shè)置雙重Probe qPCR反應(yīng)20μL體系
5. 如果每個(gè)樣本只做1次重復(fù)，則需要N+2個(gè)管用于N+2個(gè)樣本，另外1個(gè)管用于PCR陰性對照（用水做模板），1-5個(gè)管用于PCR陽性對照（試劑盒提供5種DEC的陽性對照，用戶可以任意選擇1-5種）。
數(shù)據(jù)處理
7. 陰性對照Ct必須沒有數(shù)值，等于或者大于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40。如果不符合上述要求，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效，需要重做或者跟廠家聯(lián)系。
8. 如果對照合格，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析待測樣本。
9. 對待測樣本，如果其所對應(yīng)的熒光信號的Ct小于40則為陽性。如果沒有Ct值，或大于或等于40則為陰性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
