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小鼠白血病病毒探針法qRT-LAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
小鼠白血病病毒（MuLV或MLV，Murine leukemia viruses）是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，因其能夠感染小鼠宿主和其他脊椎動物并引發(fā)癌癥而聞名?；谀迥崾蟀籽〔《镜哪孓D(zhuǎn)錄病毒載體被廣泛用于基因轉(zhuǎn)移到各種目標(biāo)細(xì)胞。小鼠白血病病毒（MuLV）分為兩類: ①急性轉(zhuǎn)化MuLV:Abelson,MuLV為其代表,基因組合有v-abl基因,編碼產(chǎn)生p120gag-abl磷蛋白,誘發(fā)小鼠B淋巴細(xì)胞白血病; ②慢性轉(zhuǎn)化MuLV:極大多數(shù)MuLV均屬于此類。這類白血病與人類的Bcr-Abl陽性白血病的發(fā)生過程極為相似。因此對小鼠白血病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定具有重要意義。為此本公司根據(jù)獨(dú)有的探針法LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡單快捷的小鼠白血病病毒RT-LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
小鼠白血病病毒（MuLV或MLV，Murine leukemia viruses）是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，因其能夠感染小鼠宿主和其他脊椎動物并引發(fā)癌癥而聞名?；谀迥崾蟀籽〔《镜哪孓D(zhuǎn)錄病毒載體被廣泛用于基因轉(zhuǎn)移到各種目標(biāo)細(xì)胞。小鼠白血病病毒（MuLV）分為兩類: ①急性轉(zhuǎn)化MuLV:Abelson,MuLV為其代表,基因組合有v-abl基因,編碼產(chǎn)生p120gag-abl磷蛋白,誘發(fā)小鼠B淋巴細(xì)胞白血病; ②慢性轉(zhuǎn)化MuLV:極大多數(shù)MuLV均屬于此類。這類白血病與人類的Bcr-Abl陽性白血病的發(fā)生過程極為相似。因此對小鼠白血病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定具有重要意義。為此本公司根據(jù)獨(dú)有的探針法LMAP技術(shù)，開發(fā)了簡單快捷的小鼠白血病病毒RT-LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供RNA樣品。
2. 恒溫擴(kuò)增，簡單快捷。
3. 含熒光探針，擴(kuò)增的專一性比染料法和電泳法更強(qiáng)。
4. 檢測靈敏性一般比RT-PCR高10倍以上。
5. 一般35分鐘內(nèi)出結(jié)果，比RT-PCR快。
6. 引物根據(jù)小鼠白血病病毒基因組的保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
7. 上樣量大，對20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到12 μL。
8. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結(jié)果。
10. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
11. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法RT-LAMP擴(kuò)增。
12. 只可用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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RT-LAMP MasterMix（可視化染料-熒光染料，待加酶） |
200μL |
0.5mL本色蓋 |
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逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液 |
100μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×小鼠白血病病毒RT-LAMP引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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小鼠白血病病毒RT-LAMP陽性對照（1×10E4拷貝/μL） |
250μL |
0.5mL黃蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用5孔盒包裝 |
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注 意：使用前請在RT-LAMP引物-探針干粉中加入110μL超純水，充分震蕩半分鐘溶解。沒用完的需要放-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 用自選方法純化樣品RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。PC用10μL本試劑盒提供的陽性對照（1×10E4拷貝/μL）加一定量的水作為樣品制備PC，加水后的總體積跟所用核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。NC用水替代。
RT-LAMP反應(yīng)20μL體系
3. 反應(yīng)設(shè)置：第一次使用一個新的試劑盒時，必須先將100uL逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（可視化染料-熒光染料，待加酶）中，蓋上蓋子后輕柔顛倒1分鐘混勻，然后再取用。
4. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2個RNA純化樣品，則設(shè)置N+4個RT-LAMP擴(kuò)增，增加RT-LAMP陰性對照和RT-LAMP陽性對照各1個。
5. 置于熒光定量PCR儀中65℃保溫60分鐘進(jìn)行擴(kuò)增，每分鐘在FAM通道采集一次熒光信號。
結(jié)果分析
結(jié)果分析
6. 樣品制備陽性對照和RT-LAMP陽性對照的反應(yīng)液將有標(biāo)準(zhǔn)的S擴(kuò)增曲線，樣品制備陰性對照和RT-LAMP陰性對照的反應(yīng)液將沒呈平線，沒有S曲線，否則提取實驗或擴(kuò)增實驗無效。如果陽性和陰性對照結(jié)果正常，則實驗有效，可以分析樣品的情況。樣品管的熒光曲線為S型，則說明樣品為陽性，如果為平線則說明待測樣品為陰性。典型的熒光檢測結(jié)果見下圖。左邊為陽性，右邊為陰性。
自備試劑
待測樣品
待測樣品
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
