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家鴿性別測定探針法qPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點
家鴿在我們?nèi)粘Ｉ钪惺殖Ｒ姡谏鷳B(tài)、經(jīng)濟(jì)和文化等方面都具有重要的價值。家鴿是單態(tài)性鳥，即雌雄同型，無論是幼鳥還是成鳥都很難從外觀形態(tài)或其他行為上區(qū)分雌雄性別，給家鴿行業(yè)的從業(yè)者帶來不便。例如對于肉鴿來說，雄鴿進(jìn)食量大，但產(chǎn)肉不如雌鴿，故養(yǎng)雌鴿經(jīng)濟(jì)效益更高，但沒法通過肉眼進(jìn)行篩選，因此家鴿的性別鑒定技術(shù)的研究和建立具有十分重要的意義。本產(chǎn)品就是以家鴿CHD（Chromobox-Helicase-DNA Binding Protein，染色體螺旋蛋白)基因為靶點，設(shè)計的專門檢測家鴿性別的探針法qPCR試劑盒，它具有下列特點：
家鴿在我們?nèi)粘Ｉ钪惺殖Ｒ姡谏鷳B(tài)、經(jīng)濟(jì)和文化等方面都具有重要的價值。家鴿是單態(tài)性鳥，即雌雄同型，無論是幼鳥還是成鳥都很難從外觀形態(tài)或其他行為上區(qū)分雌雄性別，給家鴿行業(yè)的從業(yè)者帶來不便。例如對于肉鴿來說，雄鴿進(jìn)食量大，但產(chǎn)肉不如雌鴿，故養(yǎng)雌鴿經(jīng)濟(jì)效益更高，但沒法通過肉眼進(jìn)行篩選，因此家鴿的性別鑒定技術(shù)的研究和建立具有十分重要的意義。本產(chǎn)品就是以家鴿CHD（Chromobox-Helicase-DNA Binding Protein，染色體螺旋蛋白)基因為靶點，設(shè)計的專門檢測家鴿性別的探針法qPCR試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線和用作擴(kuò)增對照，排除假陰性實驗。
4. 含識別內(nèi)源性內(nèi)參的引物和探針，便于排除PCR假陰性樣本。
5. 特異性高，靶分子的引物和探針是根據(jù)家鴿CHD-W和CHD-Z基因設(shè)計，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。彼此也不會發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法PCR反應(yīng)。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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家鴿性別測定PCR引物-探針干粉（含內(nèi)參引物探針） |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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家鴿CHD-W基因PCR陽性對照(1E4拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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家鴿CHD-Z基因PCR陽性對照(1E4拷貝/μL) |
250μL |
0.5mL白蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
1份 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入220 mL超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
1. 如果有N個樣品，設(shè)置N+2個提取，多出的一個是制備PC（樣品制備陽性對照），一個是制備NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂么_認(rèn)是陽性的樣本作為陽性對照，用確認(rèn)是陰性的樣本作為陰性對照。
2. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
3. 如果做只做1次重復(fù)實驗，則標(biāo)記N+3個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于CHD-W基因PCR陽性對照（直接用本試劑盒提供的CHD-W陽性對照為模板），1個用于CHD-Z基因PCR陽性對照（直接用本試劑盒提供的CHD-Z陽性對照為模板）。
數(shù)據(jù)處理
1. 陰性陽性判斷：沒有Ct讀數(shù)，或Ct大于40判為陰性結(jié)果。有Ct讀數(shù)，Ct值小于40，熒光信號有對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線判為陽性結(jié)果。每個反應(yīng)管均可得到FAM通道、HEX通道和Cy5通道的Ct數(shù)值和對應(yīng)的陰性和陽性結(jié)果。
2. 實驗有效性判斷：如果樣本制備陽性對照管或/和PCR陽性對照管的FAM通道信號結(jié)果為陰性，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要分析失敗原因，可能是操作、儀器和試劑三方面的原因，需要重做擴(kuò)增或/和核酸制備，也可以直接跟儀器和試劑廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對照管或/和PCR陰性對照管的FAM通道結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要分析污染原因并將污染清除。如果兩個陽性對照和兩個陰性對照結(jié)果正常，說明本次實驗有效，可以進(jìn)入下一步分析。
3. 樣本CHD-W基因檢測有效性判斷：如果待測樣本FAM通道的結(jié)果為陽性，則無論該樣本的Cy5通道（對應(yīng)內(nèi)源內(nèi)參）的結(jié)果是陰性還是陽性，該樣本FAM通道的結(jié)果有效。如果待測樣本管FAM通道的結(jié)果為陰性，Cy5通道結(jié)果也為陰性，則此樣品的陰性結(jié)果無效。此樣品需要重新提取核酸和進(jìn)行擴(kuò)增。
4. 樣本CHD-Z基因檢測有效性判斷：如果待測樣本HEX通道的結(jié)果為陽性，則無論該樣本的Cy5通道（對應(yīng)內(nèi)源內(nèi)參）的結(jié)果是陰性還是陽性，該樣本HEX通道的結(jié)果有效。如果待測樣本管HEX通道的結(jié)果為陰性，Cy5通道結(jié)果也為陰性，則此樣品的陰性結(jié)果無效。此樣品需要重新提取核酸和進(jìn)行擴(kuò)增。
5. 性別判斷：如果樣本同時為有效的FAM陽性和HEX陽性，相當(dāng)于CHD-W和CHD-Z均為陽性，則為雌性。如果樣本為HEX陽性信號陽性，相當(dāng)于CHD-Z陽性，則為雄性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
