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副溶血弧菌tdh-tlh-trh三重探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)屬于弧菌科弧菌屬，為革蘭氏陰性菌，是一種嗜鹽性細(xì)菌，廣泛存在于海水、海底沉積物、海產(chǎn)動(dòng)物（如魚、蝦、蟹、貝、海蜇等的體表或者腸道內(nèi)）和鹽分含量較高的腌制食品中（如咸菜、腌魚等）。通過食用這些海鮮動(dòng)物，副溶血弧菌可以進(jìn)入食用者的體內(nèi)，可引發(fā)急性腸胃炎、傷口感染和敗血癥，甚至導(dǎo)致感染者死亡。副溶血弧菌的主要致病因子是耐熱直接溶血素(Thermostable Direct Hemolysin，TDH)、不耐熱溶血素(Thermolabile Hemolisin，TLH)和耐熱直接溶血素相關(guān)溶血素(Thermostable Direct Hemolysin-related Hemolysin，TRH)，分別由tdh、tlh和trh基因編碼，因此，同時(shí)tdh、tlh和trh基因具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的相關(guān)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)屬于弧菌科弧菌屬，為革蘭氏陰性菌，是一種嗜鹽性細(xì)菌，廣泛存在于海水、海底沉積物、海產(chǎn)動(dòng)物（如魚、蝦、蟹、貝、海蜇等的體表或者腸道內(nèi)）和鹽分含量較高的腌制食品中（如咸菜、腌魚等）。通過食用這些海鮮動(dòng)物，副溶血弧菌可以進(jìn)入食用者的體內(nèi)，可引發(fā)急性腸胃炎、傷口感染和敗血癥，甚至導(dǎo)致感染者死亡。副溶血弧菌的主要致病因子是耐熱直接溶血素(Thermostable Direct Hemolysin，TDH)、不耐熱溶血素(Thermolabile Hemolisin，TLH)和耐熱直接溶血素相關(guān)溶血素(Thermostable Direct Hemolysin-related Hemolysin，TRH)，分別由tdh、tlh和trh基因編碼，因此，同時(shí)tdh、tlh和trh基因具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的相關(guān)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于排除假陰性結(jié)果。
4. 特異性高，引物和探針分別根據(jù)副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的DNA或副溶血弧菌的其他基因發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品只用于定性檢測(cè)，不推薦用于定量檢測(cè)。
6. tdh、tlh和trh基因分別用FAM、HEX和ROX標(biāo)記的三個(gè)探針檢測(cè)。
7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法qPCR反應(yīng)。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL |
0.5mL紅蓋管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因三重PCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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副溶血弧菌tdh基因陽(yáng)性對(duì)照（1×10E4拷貝/μL） |
50μL |
0.5mL白色管 |
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副溶血弧菌trh基因陽(yáng)性對(duì)照（1×10E4拷貝/μL） |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用十孔盒包裝 |
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注 意：在使用前需要短暫離心引物-探針干粉管，然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 如果有N個(gè)樣品，最好設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是樣本制備PC（陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是樣本制備NC（陰性對(duì)照）?？梢杂米詡涞摹⒋_定三個(gè)基因?yàn)殛?yáng)性的樣本作為樣品制備PC?？梢杂米詡涞?、確定是陰性的樣本作為樣品制備NC，可以用水替代。
2. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容。
Probe PCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
3. 如果有N+2個(gè)核酸提取，則設(shè)置N+6個(gè)PCR反應(yīng)，多出的4個(gè)1個(gè)用于PCR NC，另外三個(gè)分別用于三個(gè)待檢測(cè)基因的PCR PC。在標(biāo)記管中按下表加入各成分本表只列出一次重復(fù)。
數(shù)據(jù)處理
4. 所有PC反應(yīng)應(yīng)該在對(duì)應(yīng)的通道呈現(xiàn)陽(yáng)性，如tdh PC應(yīng)該為FAM通道陽(yáng)性，tlh PC應(yīng)該為HEX通道陽(yáng)性。如果樣本制備PC在其對(duì)應(yīng)的通道為陰性，則整個(gè)樣本制備實(shí)驗(yàn)無效。如果三個(gè)基因的PCR PC在其對(duì)應(yīng)的通道為陰性（如tlh PC為HEX通道陰性），則整個(gè)PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)無效。樣本制備無效和擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)無效時(shí)均不需要分析數(shù)據(jù)，需要找到原因后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，可能原因包括操作失誤、試劑變質(zhì)或儀器故障。NC：樣本制備NC和PCR NC應(yīng)該在所有通道呈陰性。如果樣本制備NC或PCR NC結(jié)果在任何通道為陽(yáng)性，則整個(gè)樣本制備和PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要找到原因后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。可能原因是環(huán)境污染。如果PC和NC均正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以對(duì)待測(cè)樣本結(jié)果進(jìn)行分析。
5. 樣本結(jié)果分析：如果FAM通道、HEX通道和ROX通道的Ct大于或等于40，或者沒有Ct值，則判為陰性。如果Ct小于40，并且熒光信號(hào)呈現(xiàn)倒S的典型擴(kuò)增曲線，則判斷為該通道對(duì)應(yīng)的基因陽(yáng)性。FAM通道陽(yáng)性則表示含有tdh基因，HEX通道陽(yáng)性則表示含有tlh基因，ROX通道陽(yáng)性則表示含有trh基因。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
