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人IL-6(白細(xì)胞介素6)基因174 GC點(diǎn)突變探針法qPCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人IL-6基因（interleukin-6，白細(xì)胞介素6）是與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子。它通過調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)，在宿主防御中發(fā)揮著重要作用。糖尿病患者存在IL-6基因174G>C多態(tài)性，不同基因型 IL-6 水平不同，IL-6基因174G>C點(diǎn)突變的患者，IL-6水平明顯增高，且差異具有顯著性。因此研究人IL-6基因174G>C點(diǎn)突變具有重要的研究意義，為此本公司開發(fā)了專門檢測(cè)人IL-6基因174G>C點(diǎn)突變的探針法qPCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
規(guī)格及成分
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人IL-6基因（interleukin-6，白細(xì)胞介素6）是與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子。它通過調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)，在宿主防御中發(fā)揮著重要作用。糖尿病患者存在IL-6基因174G>C多態(tài)性，不同基因型 IL-6 水平不同，IL-6基因174G>C點(diǎn)突變的患者，IL-6水平明顯增高，且差異具有顯著性。因此研究人IL-6基因174G>C點(diǎn)突變具有重要的研究意義，為此本公司開發(fā)了專門檢測(cè)人IL-6基因174G>C點(diǎn)突變的探針法qPCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到1000拷貝/μL。
3. 分辨率高，能檢測(cè)出5%的點(diǎn)突變。
4. 一管式檢測(cè)，野生型探針用FAM標(biāo)記，突變型探針用Cy5標(biāo)記。
5. 同時(shí)提供野生型和突變型兩種陽性對(duì)照，便于排除假陰性樣品。
6. 特異性高，引物和探針是根據(jù)人IL-6基因174G>C位點(diǎn)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他突變發(fā)生交叉反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能定性，不能定量。
8. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的點(diǎn)突變探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
9.本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×點(diǎn)突變Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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人IL-6基因rs1800795位點(diǎn)檢測(cè)引物-探針混合液干粉 |
50次 |
0.5 mL白色管 |
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人IL-6基因野生型陽性對(duì)照(1E4拷貝/μL) |
250 μL |
1.5mL棕色管 |
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人IL-6基因rs1800795位點(diǎn)突變型陽性對(duì)照 (1E4拷貝/μL) |
250 μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用5孔盒包裝 |
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注 意：使用前需要在引物探針干粉管中加入220 μL的自備超純水，震蕩混勻后再取用一次沒用完剩下的需要放-20℃保存。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 如果有N個(gè)樣品，則進(jìn)行N次純化，得到的DNA溶解在TE中，并需要用NanoDrop進(jìn)行定量。濃度不能低于0.2 μg/μL。
2. 本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。
點(diǎn)突變Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
3. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+3個(gè)PCR管，其中N個(gè)用于上步得到的N樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板，NC），3個(gè)用于陽性對(duì)照（PC）。
4. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子后加。
數(shù)據(jù)處理
1. 實(shí)驗(yàn)有效性的判斷：首先分析擴(kuò)增NC是否有FAM或/和Cy5信號(hào)，如果有則表示實(shí)驗(yàn)污染，本次實(shí)驗(yàn)無效，無需分析所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，需要尋找原因。如果無則表示實(shí)驗(yàn)沒有污染，再分析三個(gè)PC。如果野生型PC沒有FAM擴(kuò)增信號(hào)（有標(biāo)準(zhǔn)的倒S擴(kuò)增曲線，下同），或突變型PC沒有Cy5擴(kuò)增信號(hào)，或雜合型PC沒有FAM和Cy5擴(kuò)增信號(hào)，則表示實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析樣本的數(shù)據(jù)，需要分析原因。如果三個(gè)PC正常（野生型PC有FAM擴(kuò)增信號(hào)，突變型PC有Cy5擴(kuò)增信號(hào)，雜合型PC有FAM和Cy5擴(kuò)增信號(hào)），則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣本的數(shù)據(jù)。
2. 如果熒光定量PCR儀有基因分型的自動(dòng)分析模塊，則進(jìn)入該模塊，獲得每個(gè)樣本的Cy5值/FAM值的熒光比值，并根據(jù)熒光比值描出散點(diǎn)圖。熒光比值位于散點(diǎn)圖的X軸方向的樣本可以判為突變型，熒光比值將位于Y軸方向的樣本可以判為野生型，熒光比值位于X軸和Y軸中間的可以判為雜合子。擴(kuò)增NC的熒光比值將位于原點(diǎn)附近。
3. 如果熒光定量PCR儀沒有基因分型的自動(dòng)分析模塊，則需要手動(dòng)分析。首先根據(jù)Ct值判斷每個(gè)樣本在FAM和Cy5兩個(gè)通道的擴(kuò)增情況。如果FAM通道的Ct低于35，則算FAM信號(hào)有擴(kuò)增。如果Ct大于35或沒有Ct，則算FAM通道無擴(kuò)增。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
