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細菌和真菌雙重探針法PCR試劑盒

規(guī)格：

品牌 : 通蔚生物
目錄號 : TW-E10562
應用 : 僅限于科研使用
貨期 : 1年
規(guī)格：50T

細菌和真菌雙重探針法PCR試劑盒

產品及特點

細菌（Bacteria）和真菌（Fungus）是兩類重要的微生物。細菌是單細胞生物，個體微小，結構簡單，沒有成形的細胞核，屬于原核生物。細菌形態(tài)多樣，有球狀、桿狀和螺旋狀等。細菌廣泛分布于自然界，在物質循環(huán)、生物共生等方面發(fā)揮著重要作用。但部分細菌能引起人類和動植物的多種疾病。真菌具有真正的細胞核，屬于真核生物。真菌形態(tài)和大小差異較大，有單細胞的酵母菌，也有多細胞的霉菌和大型真菌。真菌在食品加工、釀造、醫(yī)藥生產等領域有重要應用，然而也有一些真菌會引發(fā)人類和動植物的感染性疾病?？傊?，細菌和真菌在生態(tài)系統(tǒng)和人類生活中既有有益的一面，也可能帶來一定的危害。因此對細菌和真菌進行快速檢測具有重要的意義。本產品就是以探針法PCR技術為基礎開發(fā)的專門對細菌和真菌進行檢測的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應。

3. 提供陽性對照，便于排除假陰性結果。

4. 特異性高，引物是根據(jù)細菌和真菌DNA高度保守區(qū)設計，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應。

5. 本產品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。

6. 細菌的探針用FAM標記，真菌的探針用Cy5標記。

7. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

8. 本產品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分	規(guī)格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	0.5mL	0.5mL本色蓋
細菌和真菌雙重PCR引物-探針干粉	50次	1.5mL棕色管
細菌PCR陽性對照(1E4拷貝/μL)	250μL	0.5mL黃蓋管
真菌PCR陽性對照(1E4拷貝/μL)	250μL	0.5mL白蓋管
使用手冊	1份	無
本產品采用五孔盒包裝
注意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入220mL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

一、樣品DNA的制備

1. 如果有N個樣品，好設置N+3個提取，多出的一個是細菌樣品制備的PC（陽性對照），一個是真菌樣品制備的PC，一個是樣品制備NC（陰性對照）。可以用10 μL細菌PCR陽性對照（1E4拷貝/μL）再加上一定量的水使總體積跟樣本制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為細菌樣品制備PC；可以用10 μL真菌PCR陽性對照（1E4拷貝/μL）再加上一定量的水使總體積跟樣本制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為真菌樣品制備PC。另外用水作為樣品制備NC，水的總體積需要跟樣本制備試劑盒所要求的樣本體積一樣。

2. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

二、Probe qPCR反應20 μL體系，在樣品制備室進行

做定性分析只做1次重復，需標記N+3+3個PCR管，其中N+3個用于上步得到的N+3個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于細菌PCR陽性對照，1個用于真菌PCR陽性對照。

數(shù)據(jù)處理

1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。

2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續(xù)分析。

3. 對定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照的Ct必須大于40，或者沒有Ct值。陽性對照的熒光信號必須有對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40。對待測樣品，如果其FAM通道的Ct大于40則為細菌陰性，如果小于或等于40則為細菌陽性。如果其Cy5通道的Ct大于40則為真菌陰性，如果小于或等于40則為真菌陽性。

自備試劑
超純水，樣品DNA

運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年

021-54845833/15800441009

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