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產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有牛亞科動(dòng)物和羊亞科動(dòng)物的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。此外還有很多情況需要檢測(cè)非食品樣本中是否有牛亞科動(dòng)物和羊亞科動(dòng)物源性成分。本產(chǎn)品就是為滿足這些需求根據(jù)PCR原理開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有牛亞科動(dòng)物和羊亞科動(dòng)物的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。此外還有很多情況需要檢測(cè)非食品樣本中是否有牛亞科動(dòng)物和羊亞科動(dòng)物源性成分。本產(chǎn)品就是為滿足這些需求根據(jù)PCR原理開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏度高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)小麥蜜穗病菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針?lè)╭PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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牛亞科和羊亞科動(dòng)物源性成分雙重qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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牛亞科動(dòng)物源性成分PCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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羊亞科動(dòng)物源性成分PCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL白蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入220 mL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋牛亞科動(dòng)物源性成分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以陽(yáng)性對(duì)照1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。
稀釋牛亞科動(dòng)物源性成分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以陽(yáng)性對(duì)照1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為A6、A5、A4、A3、A2、A1。
2. 在A1-A6號(hào)管中各加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液。
3. 在A6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線PC樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在A5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在A4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作得到A1-A6共六個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線陽(yáng)性樣品。放冰上待用。
稀釋羊亞科動(dòng)物源性成分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品
7. 操作同上，只是使用羊亞科動(dòng)物源性成分的PC作為模板。得到6個(gè)濃度的樣本放冰上待用，分別是B1-B6。
樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+3個(gè)提取，多出的一個(gè)是牛亞科動(dòng)物源性成分的PC（牛樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是羊亞科動(dòng)物源性成分的PC（羊樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂么_認(rèn)是牛亞科動(dòng)物的材料作為牛PC，可以用確認(rèn)是羊亞科動(dòng)物的材料作為羊PC，用確認(rèn)是非牛亞科動(dòng)物和非羊亞科動(dòng)物的材料（或水）為NC。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
10. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+3+1+6+6個(gè)PCR管，其中N+3個(gè)用于上步得到的N+3個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于牛亞科動(dòng)物源性成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，另外6個(gè)用于羊亞科動(dòng)物源性成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+3+3個(gè)PCR管，其中N+3個(gè)用于上步得到的N+3個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于牛亞科動(dòng)物源性成分PCR陽(yáng)性對(duì)照，1個(gè)用于羊亞科動(dòng)物源性成分PCR陽(yáng)性對(duì)照（直接用第一步和第二步所得的兩個(gè)4號(hào)稀釋液分別作為模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照或制備陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果為陰性，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴(kuò)增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴(kuò)增陰性對(duì)照或制備陰性對(duì)照結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購(gòu)買(mǎi)新的引物和探針。
2. 如果陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，分別以陽(yáng)性對(duì)照（FAM通道）和（Cy5通道）的Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，陽(yáng)性對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)曲線為斜線，r2必須大于0.95。再以待測(cè)樣品的Ct值從陽(yáng)性對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 對(duì)定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照的Ct必須大于40，或者沒(méi)有Ct值。陽(yáng)性對(duì)照的熒光信號(hào)必須有對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40。對(duì)待測(cè)樣品，如果其FAM通道的Ct大于40則為牛亞科源動(dòng)物性成分陰性，如果小于或等于40則為牛亞科動(dòng)物源性成分陽(yáng)性。如果其Cy5通道的Ct大于40則為羊亞科動(dòng)物源性成分陰性，如果小于或等于40則為羊亞科源動(dòng)物性成分陽(yáng)性。
自備試劑
超純水，樣品DNA
超純水，樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
