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    ELISA實驗技巧:ELISA(雙抗體夾心法)檢測HBsAg

    發(fā)布時間:2021-06-11     發(fā)布作者:上海通蔚生物

    已知抗體(抗HBs)包被載體,然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入,共同孵育后,抗原結(jié)合于包被抗體上,再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs),酶標(biāo)抗體連接到抗原上,最后加入底物溶液,根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。



    【材料】

    HBsAg試劑盒,本試劑盒含:
    1、包被抗-HBs反應(yīng)條
    1瓶
    2、酶結(jié)合物
    1瓶
    3、HBSAg陽性對照
    1瓶
    4、HBsAg陰性對照
    1瓶
    5、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋
    1瓶
    6、顯色劑(TMB)A
    1瓶
    7、顯色劑(TMB)B
    1瓶
    8、終止液
    1瓶


    【方法】

    1、加入待測標(biāo)本每孔0.05ml,并設(shè)HBsAg陽性對照2孔,HBsAg陰性對照2孔,空白對照1孔,然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加),充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
    2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔,棄去拍干,反復(fù)五次后拍干。
    3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),混勻,37℃孵育10分鐘。
    4、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻。


    【結(jié)果】

    比色法:波長450nm,先用空白孔校零點,然后讀取各孔光密度值。
    樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性,否則為陰性。
    備注:陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8,實驗結(jié)果有效。


    【注意事項】

    1、試劑盒置2℃~8℃保存。
    2、使用前試劑應(yīng)搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加。
    3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔條,置室溫平衡30分鐘后再行測試,余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。
    4、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。
    5、不同批號試劑請勿通用。
    6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。
    7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時,請置37℃至溶解。

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