ELISA實驗操作要點：ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置？最近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/span>
1、ELISA實驗包被緩沖液
2、ELISA實驗洗滌緩沖液
3、ELISA實驗稀釋液
4、ELISA實驗終止液
5、ELISA底物緩沖液
6、ELISA實驗TMB四甲基聯(lián)苯胺、使用液
7、ELISA實驗ABTS使用液
8、ELISC

試劑
1、ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液)：
NaHCO3 1.59g
NaHCO3 2.93g
加蒸餾水至 1000ml

2、ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H2O 2.9g
NaCl 8g
KCl 0.2g
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至 1000ml

3、ELISA實驗稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗滌緩沖液至 100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

4、ELISA實驗終止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸98%、 21.7ml。

5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)：
0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2g/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml

6、ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液：

TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl

7、ELISA實驗ABTS使用液：
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl

8、ELISA實驗封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) 5g
加洗滌緩沖液至 100ml
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。