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幫助
021-54845833/15800441009
測定意義
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質(zhì)；后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物，其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平。
測定原理
MDA與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在532nm有最大吸收峰，進(jìn)行比色后可估測樣品中過氧化脂質(zhì)的含量；同時(shí)測定600nm下的吸光度，利用532nm與600nm下的吸光度的差值計(jì)算MDA的含量。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
測定步驟
1、在1.5mL EP管中依次加入：
2、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，測定532nm和600nm處的吸光度，記為A532和A600，ΔA= A532-A600
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
測定步驟
1、在1.5mL EP管中依次加入：
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試劑名稱(μL) |
測定管 |
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試劑一 |
300 |
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樣本 |
100 |
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混勻，95℃水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心10min |
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預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
