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    品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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    • 馬β-內(nèi)啡肽(βEP)ELISA試劑盒

      規(guī)格:
      價(jià)格:
      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目錄號 : TW-E4425
      • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
      • 英文名 :Horse βEP ELISA KIT
      • 貨期 : 現(xiàn)貨
      • 靈敏度 :7.82pg/mL
      • 規(guī)格 :48T/96T
      • 檢測范圍 :15.63 ~ 1000pg/mL
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    馬β-內(nèi)啡肽(βEP)ELISA試劑盒
    簡介 
    β-內(nèi)啡肽是一種內(nèi)源性阿片類神經(jīng)肽和肽類激素,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)的某些神經(jīng)元中產(chǎn)生,β-內(nèi)啡肽被認(rèn)為是內(nèi)源性阿片類和內(nèi)啡肽類神經(jīng)肽的一部分;所有已確定的內(nèi)源性阿片類肽都含有相同的N端氨基酸序列, 即Tyr-Gly-Gly-Phe,后面是-Met 或-Leu,β-內(nèi)啡肽存在于下丘腦的神經(jīng)元, 以及垂體的神經(jīng)元,它來源于β-促腎上腺皮質(zhì)激素,后者在垂體中由一個(gè)較大的多肽前體--原腎上腺皮質(zhì)激素(POMC)產(chǎn)生,POMC被裂解為兩種神經(jīng)肽,即促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和β-促腎上腺皮質(zhì)激素,然后,β-內(nèi)啡肽的形成是β-促脂素C端區(qū)域裂解的結(jié)果,產(chǎn)生一個(gè)31個(gè)氨基酸長的神 經(jīng)肽,具有α-螺旋二級結(jié)構(gòu),然而,POMC也產(chǎn)生其他肽類激素,包括α-和γ-黑素細(xì)胞刺激素(MSH),是由被稱為原激素轉(zhuǎn)化酶的內(nèi)部酶在細(xì)胞內(nèi)加工產(chǎn)生的。
    檢測原理
    本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物βEP,清洗后,再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中βEP的濃度。
    需要的其他材料
    1.  酶標(biāo)儀,包含450nm測定波長,同時(shí)包含600-680nm校正波長更佳;
    2.  移液器及槍頭;
    3.  蒸餾水或去離子水;
    4.  100-1000 mL刻度量筒;
    5.  洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī);
    6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
    7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
    樣品保存
    樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
    試劑準(zhǔn)備工作
    使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
    洗滌液/稀釋液配置
    如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
    標(biāo)準(zhǔn)品配置
    試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個(gè)試管,先從20ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至1000pg/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的1000pg/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個(gè)單獨(dú)的試管中將1000pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個(gè)梯度,共配制7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為:  1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/mL)。

    馬(βEP)ELISA試劑盒

    抗體工作液配置
    使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
    酶結(jié)合物工作液配置
    使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
    備 注:如待測樣本中βEP濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,請根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
    結(jié)果的計(jì)算
    計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
    示例數(shù)據(jù)

    以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)

    1000

    500

    250

    125

    62.5

    31.25

    15.63

    0

    OD值

    2.596

    1.643

    0.967

    0.622

    0.443

    0.298

    0.167

    0.08

    校正OD值

    2.516

    1.563

    0.887

    0.542

    0.363

    0.218

    0.087

    0


    下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計(jì)算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計(jì)算樣本結(jié)果

    馬(βEP)ELISA試劑盒

    重復(fù)性
    板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。
    靈敏度 
    經(jīng)樣本測試,本試劑盒的檢測靈敏度為7.82pg/mL。
    特異性
    該試劑盒測定可識別重組馬βEP。
    其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
    使用ELISA試劑盒之前,請您必須完整閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療。
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