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    • 馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒

      規(guī)格:
      價格:
      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目錄號 : TW-E4421
      • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
      • 英文名 :Horse BDNF ELISA KIT
      • 貨期 : 現(xiàn)貨
      • 靈敏度 :0.08ng/mL
      • 規(guī)格 :48T/96T
      • 檢測范圍 :0.156 ~ 10ng/mL
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    馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒
    簡介 
    腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),或稱abrineurin,是一種蛋白質(zhì),由BDNF基因編碼。BDNF是神經(jīng)營養(yǎng)素家族的成員,與典型的神經(jīng)生長因子有關(guān),神經(jīng)營養(yǎng)因子存在于大腦和周邊地區(qū),BDNF于1982年由Yves-Alain Barde和Hans Thoenen首次從豬腦中分離出來,BDNF作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)的某些神經(jīng)元,幫助支持現(xiàn)有神經(jīng)元的生存,并鼓勵新神經(jīng)元和突觸的生長和分化,在大腦中,它在海馬體、皮層和基底前腦--對學(xué)習(xí)、記憶和高級思維至關(guān)重要的區(qū)域--中表現(xiàn)活躍,BDNF本身對長期記憶很重要,盡管哺乳動物大腦中的絕大多數(shù)神經(jīng)元是在產(chǎn)前形成的,但在一個被稱為神經(jīng)發(fā)生的過程中,成人大腦的部分區(qū)域仍能從神經(jīng)干細(xì)胞中生長出新的神經(jīng)元,神經(jīng)營養(yǎng)素是有助于刺激和控制神經(jīng)發(fā)生的蛋白質(zhì),BDNF是其中最活躍的一種。
    檢測原理
    本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物BDNF,清洗后,再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中BDNF的濃度。
    需要的其他材料
    1.  酶標(biāo)儀,包含450nm測定波長,同時包含600-680nm校正波長更佳;
    2.  移液器及槍頭;
    3.  蒸餾水或去離子水;
    4.  100-1000 mL刻度量筒;
    5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機;
    6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
    7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
    樣品保存
    樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
    試劑準(zhǔn)備工作
    使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
    洗滌液/稀釋液配置
    如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
    標(biāo)準(zhǔn)品配置
    試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個試管,先從200ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至10ng/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的10ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將10ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為:  10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.156ng/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ng/mL)。


    馬(BDNF)ELISA試劑盒

    抗體工作液配置
    使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
    酶結(jié)合物工作液配置
    使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
    備 注:如待測樣本中BDNF濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
    結(jié)果的計算
    計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
    示例數(shù)據(jù)

    以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)

    10

    5

    2.5

    1.25

    0.625

    0.313

    0.156

    0

    OD值

    2.576

    1.641

    0.915

    0.671

    0.428

    0.285

    0.2

    0.055

    校正OD值

    2.521

    1.586

    0.86

    0.616

    0.373

    0.23

    0.145

    0


    下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計算樣本結(jié)果

    馬(BDNF)ELISA試劑盒

    重復(fù)性
    板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。
    靈敏度 
    經(jīng)樣本測試,本試劑盒的檢測靈敏度為0.08ng/mL。
    特異性
    該試劑盒測定可識別重組馬BDNF。
    其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
    使用ELISA試劑盒之前,請您必須完整閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療。
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