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    最新產(chǎn)品

    • 小鼠絲裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)ELISA試劑盒

      規(guī)格:
      價(jià)格:
      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目錄號(hào) : TW-E5395
      • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
      • 英文名 :Mouse MAPK1 ELISA KIT
      • 貨期 : 現(xiàn)貨
      • 靈敏度 :0.06ng/mL
      • 規(guī)格 :48T/96T
      • 檢測(cè)范圍 :0.125 ~ 8ng/mL
    • 商品詳情
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    • 相關(guān)產(chǎn)品
    小鼠絲裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)ELISA試劑盒
    簡(jiǎn)介
    絲裂原活化蛋白激酶 1,也被稱為MAPK1或MAPK1,是由MAPK1基因編碼的酶,該基因編碼的蛋白質(zhì)是MAP激酶家族的成員,MAP激酶,也稱為細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控激酶(ERK),充當(dāng)多種生化信號(hào)的整合點(diǎn),并參與各種細(xì)胞過(guò)程,如增殖,分化,轉(zhuǎn)錄調(diào)控和發(fā)育,這種激酶的激活需要通過(guò)上游激酶進(jìn)行磷酸化,激活后,該激酶轉(zhuǎn)位到受刺激細(xì)胞的細(xì)胞核,在那里它磷酸化核靶標(biāo),已經(jīng)報(bào)道了兩個(gè)交替剪接的轉(zhuǎn)錄本變體編碼相同的蛋白質(zhì),但在UTR中不同,用于該基因,它含有多個(gè)磷酸化和泛素化的氨基酸位點(diǎn)。
    檢測(cè)原理
    本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物MAPK1,清洗后,再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過(guò)程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)OD值,顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中MAPK1的濃度。
    需要的其他材料
    1.  酶標(biāo)儀,包含450nm測(cè)定波長(zhǎng),同時(shí)包含600-680nm校正波長(zhǎng)更佳;
    2.  移液器及槍頭;
    3.  蒸餾水或去離子水;
    4. 100-1000 mL刻度量筒;
    5.  洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī);
    6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;

    7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。

    樣品保存

    樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

    試劑準(zhǔn)備工作
    使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
    洗滌液/稀釋液配置:如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)

    標(biāo)準(zhǔn)品配置
    試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個(gè)試管,先從160ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至8ng/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的8ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個(gè)單獨(dú)的試管中將8ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個(gè)梯度,共配制7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為: 8ng/mL、 4ng/mL、 2ng/mL、 1ng/mL、 0.5ng/mL、 0.25ng/mL、 0.125ng/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ng/mL)。

    小鼠(MAPK1)ELISA試劑盒


    抗體工作液配置

    使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
    酶結(jié)合物工作液配置
    使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
    備 注:如待測(cè)樣本中MAPK1濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
    結(jié)果的計(jì)算
    計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
    示例數(shù)據(jù)
    以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)

    8

    4

    2

    1

    0.5

    0.25

    0.125

    0

    OD值

    2.496

    1.754

    0.995

    0.64

    0.524

    0.292

    0.153

    0.067

    校正OD值

    2.429

    1.687

    0.928

    0.573

    0.457

    0.225

    0.086

    0


    下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計(jì)算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計(jì)算樣本結(jié)果。


    小鼠(MAPK1)ELISA試劑盒

    重復(fù)性

    板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。
    靈敏度
    經(jīng)樣本測(cè)試,本試劑盒的檢測(cè)靈敏度為0.06ng/mL。
    特異性
    該試劑盒測(cè)定可識(shí)別重組小鼠MAPK1。

    其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測(cè)定交叉反應(yīng)性。沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。

    使用ELISA試劑盒之前,請(qǐng)您必須完整閱讀說(shuō)明書(shū),本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療

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